高效液相色谱与化学计量学方法联用
FYBS方型精密筛分机刘广军
（济宁师范专科学校化学系,272025 ,山东省济带式输送机械宁市）
摘要:用邻苯二甲醛和N-板式输送机乙酰-L 半胱氨酸作为柱前手性衍生化试剂,使用常规反相高效液相色谱法拆
分DL-氨基反击破设备酸对映体,对于不能达到基线分离的色谱峰,应用化学计量学方法计算分析,从而达到同时定量测
定多种氨微型电振给料机基酸对映体的目的.
关键词:氨基酸;手性分离;高效液相色谱;衍生电磁电机振动给料机
近年来氨基煤矿输送机酸分析在生物化学、药学和临床研究上都有着广泛而重要的应用. 氨基酸的分离,尤其
圆震动筛是氨基酸对映体的分离一直是国内外的研究热点.在手性分离这一领域,高效液相色谱法（HPLC）一直
是最广泛使用的圆锥式破碎机方法. 目前高效液定量给料机相色谱分离手性化合物主要有两种方法DS型斗式连续输送机:一种是直接分离法,也就是利用手
性固定相直接分离手性化合物对映体. 王亚丽[1 ] 等曾用纤维素-三ZSK型直线双层振动筛（ 3 , 5-二甲基苯基氨基甲酸酯）
（CD煤仓振打器MPC） 手性柱在正相模式下拆分了3 种外消旋氨基酸的衍生物. 另一种是间接分离法,目前主要是
柱前衍生化法———将手性化合物柱前振动筛分机衍生化,将对映体转化为非对映体,进而使用常规柱完成分离分
析. 吕海涛[2 ] 曾讨论过柱前衍生法拆分DL-氨基酸时皮带提升机流动相的影响.
本文主要讨论使用柱前衍生法分离多种氨基酸的对映体,并将化学计量学方法引入丝氨酸对映体重叠峰的分析,可以一次性地定量分析多种氨基酸对映体.所用衍生剂为邻苯二甲醛（OPA） 和N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC） [2 ,3 ] . NAC是一种手性硫醇,其它手性硫醇如N-乙酰-D-青霉胺（NAP） 、N-异丁酰-L-半胱氨酸（ IBLC） 、N-异丁酰-D-半胱氨酸（IBDC） [4 ] 也可与OPA 一起做为衍生剂.
1 实验部分
1. 1 试剂与仪器
DL-丝氨酸（上海丽珠东风生物技术有限公司） ;L-丝氨酸、β丙氨酸、DL-丙氨酸、L-丙氨酸、DL-苯丙
氨酸、L-苯丙氨酸、DL-缬氨酸、L-缬氨酸、硼酸、氯化钾、氢氧化钠、乙酸钠（中国医药集团上海化学试剂公司）;邻苯二甲醛（以下简称OPA ,中国医药集团上海化学试剂公司） ;N-乙酰-L-半胱氨酸（以下简称
NAC ,Lancaster 公司） ;甲醇（HPLC 级,Merck 公司） ;高纯水. 除甲醇和水外其他试剂均为分析纯.
美国Aglient HP1100 高效液相色谱仪（DAD 检测器） ,ChemStation 化学工作站. 美国Aglient8453 UV
- Vis 光谱仪.
1. 2 样品预处理[5 ]
各氨基酸样品配制成浓度约为0. 01 M 的水溶液.硼酸缓冲液的配制:硼酸（0. 01 M） 、氢氧化钠
（0. 01 M） 和水按体积比50∶45∶5 配制得到pH 为9. 3的硼酸缓冲液.衍生剂的配制:将53. 3 mg OPA溶于50 mL 甲醇得到OPA 甲醇溶液. NAC 溶于硼酸缓冲液中（0. 00286 M） . 取12 mL OPA 甲醇溶液、10mL NAC 硼酸溶液,添加3 mL 硼酸缓冲液至25 mL ,得到OPAPNAC 衍生剂.
1. 3 衍生反应
将0. 1 mL 氨基酸与5 mL OPAPNAC 衍生剂彻底混合5 min 后过滤进样分析.
1. 4 色谱条件
ZORBAX Eclipse XDB - C8 色谱柱（4. 6 mm 3 150mm , 5μm） . 不同比例的甲醇和0.05 M醋酸钠水溶
液为流动相,流速1 mL·min - 1 ,进样量20μL. 所有的色谱分离均在室温下进行, 在线检测波长为334
nm ,DAD 检测波长范围为190～400 nm. 非负矩阵因子分解（NMF） 计算截取的数据波长范围为320 nm～390nm.
1. 5 数据处理方法
本实验采用非负矩阵因子分解（NMF） [6 ] 计算两个混合组分的纯谱. 非负矩阵因子分解是在“非负”
限制约束条件下的一种矩阵分解新方法,它的基本思路是将非负矩阵V 分解成两个非负因子矩阵W
和H.NMF 算法中采用了乘法更新公式（见公式（1）和（2） ） ,所以不必采用其它限制条件即能保证分解
结果“非负”.
2 结果与讨论
2. 1 氨基酸对映体的分离
氨基酸与衍生剂的反应生成异吲哚类产物[7 ] ,反应方程式见图1. 由紫外测量得到的图谱可看出,
此类衍生产物在230 nm 和334 nm 处各有一个最大吸收（见图2） . 但由于230 nm 处较易受干扰,故在色
谱实验中除了记录全波长数据外,选择334 nm 作为检测波长. 下文中所提到的氨基酸色谱峰均为其经
过上述衍生化后所得到的衍生物的色谱峰.
图1 DL-丙氨酸的衍生反应方程式
图2 2β丙氨酸衍生物在190 nm～400 nm 处紫外吸收
实验结果表明,在甲醇∶醋酸钠溶液为30∶70 的淋洗条件下,除DL-丝氨酸的两种对映体有部分重
叠外,DL-丙氨酸、DL-缬氨酸和DL-苯丙氨酸的对映体能得到基线分离,但是DL-缬氨酸的两种对映体
出峰时间为17 min 和25 min ,DL-苯丙氨酸的两种对映体出峰时间为38 min 和43 min.此分离条件下,不仅浪费流动相,而且峰形不理想. 如果将流动相的比例调节至45∶55 ,虽然可使DL-缬氨酸和DL-苯丙氨
酸的对映体在10 min 内洗脱出峰,但将使DL-丝氨酸及DL-丙氨酸完全或部分重叠.
考虑到DL-缬氨酸和DL-苯丙氨酸保留过强的情况,操作中采用了简单的梯度淋洗,在前三种氨基
酸全部出峰后,改变流动相配比使DL-缬氨酸和DL-苯丙氨酸快速出峰. 淋洗方案如下:在0～6 min 内
保持甲醇∶醋酸钠溶液为30∶70 不变,在6～7 min 由此比例线性变化至45∶55 ,在7 min 以后保持45∶55
不变. 各对对映体的定性采用左旋光学纯标样通过内标法确定.β丙氨酸没有手性,没有对映异构体,
只有一个色谱峰. 图3 为DL-丝氨酸、DL-丙氨酸、β丙氨酸、DL-缬氨酸和DL-苯丙氨酸混合物衍生后的
色谱图.
图3 四种外消旋氨基酸和β丙氨酸的色谱
2. 2 波谱解析法的使用
由图3 可看出,尽管采用梯度洗脱,此谱中仍有一对重叠峰—丝氨酸的两个对映体. 在这种情况下,
如果要定量分析此体系,知道两组分的实际峰面积是必需的. 我们使用非负矩阵因子分析解析出两组
分的纯谱（见图4） ,但此结果与实际纯谱还存在一个系数关系,即AXD-Ser + BXL-Ser = YDL-Ser .为得到两组分实际的纯谱,我们用最小二乘回归（ least squaresregress , LSR） 来计算系数A 和B,得到的结果如下（见图5） : A = 72. 59 ; B = 75. 98. 此系数乘以各自组分的纯谱即为两组分的实际峰面积.
2. 3 各对映体的定量分析
2. 3. 1 标准曲线的建立 采用单一对映体标样在不同浓度值下的色谱峰面积或峰高建立标准曲线.
实验中选用L-丙氨酸和L-苯丙氨酸作为两种标样,L-丙氨酸对应甲醇∶醋酸钠= 30∶70 的色谱条件,L-
苯丙氨酸对应甲醇∶醋酸钠= 45∶55 的色谱条件. 以浓度对峰面积或峰高进行线性拟和,得到标准曲线
方程（见图6 ,7） . 通过此方程可以测定混合样品中两个标样组分的浓度.
2. 3. 2 其它组分相对浓度预报 在同样的色谱条件下,体系中各组分的含量比与其色谱峰面积比成
线性关系. 各组分的峰面积和所占面积面分比结果见表1 ,其中D-丝氨酸和L-丝氨酸的单峰面积是根据上述化学计量学方法计算而得.
3 结 论
本文运用柱前衍生化法使用常规反相高效液相色谱实现了4 种氨基酸对映体的拆分,达到了较好
的分离效果,并实现了多组分定量分析. 文中所用的淋洗方案也比较简单. 使用计算方法解析重叠峰相
对降低了对色谱峰分离度的要求,这对于分析更加复杂的样品体系是很有帮助的
相关资讯
- 对电磁阀基本特性与相关参数的介绍
- 双轴粉尘加湿搅拌机整体的固定
- 机械类常用英语：射出成形关联用语
- 微波是怎样杀菌的？
- 如何测试备用蓄电池内阻
- 热烈祝贺黎明重工新型移动式破碎站成功投放市场
- 无需燃料自产能量 SEADOG泵通过测定
- 新加坡五金机械业市场调研
- 2007年煤炭价格将高于预期
- 洛阳市致力实业成功入选“2011中国水泥行业供应商百强榜”
相关产品
- 链条输送
- 链条输送机是在承载链条上，可以直接用链条作为输送载体或者每节链条之间再加上一较高的承载滚子附件来承载货物。
- 带式输送机(TD75)
- 南通康诚重工机械有限公司主要生产各种规格的矿山机械、输送机械、给料机械、振动筛、破碎机、振动机械等等
- 粉体输送机
- 管链式粉体输送机是输送粉状、小颗粒状及小块状等散状物料的连续输送设备，可以水平、倾斜和垂直组合输送。广泛应用于化工，化纤，农药矿石，食品工业，建筑材料等到行业。
- 铸石刮板输送机
- XGZ型系列铸石槽刮板输送机广泛应用于电厂、选煤厂、港口、矿山、冶金、化工等行业输送煤炭及粉、粒、块状散料。
- 粉料输送机
- 螺旋粉料输送机输送能力大，运距长，螺旋粉料输送机还可在输送过程中同时完成若干工艺操作，所以螺旋粉料输送机应用十分普遍。
- 垂直振动输送机(ZC)
- 垂直振动输送机用于粉状、颗粒状物料的垂直提升作业，也可对物料进行干燥、冷却作业。
.jpg)
- 移动皮带机
- DY系列可移动式带式输送机又叫DY移动带式输送机、DY移动皮带机、DY移动式皮带机是一种工效高，使用，机动性好的连续输送装卸设备。主要用于装卸地点经常变更动的场所，用来短途运输及装卸散料或单件重量100公斤以下的成件物品。
- 螺旋输送机(GLS型)
- 南通康诚重工机械有限公司主要生产各种规格的矿山机械、输送机械、给料机械、振动筛、破碎机、振动机械等等
- 小型皮带输送机
- 小型皮带输送机根据市场需要开发的新型输送机，具有占地面积小、安装方便、输送量大等优点。
- 大倾角带式输送机
- 大倾角带式输送机是能大量节省设备占地面积，彻底解决了普通、花纹带式输送机所不能达到的输送角度，从水平到倾斜（或垂直）能平稳过渡且能耗低，结构简单，维修方便的输送机。
- 螺旋输送机(GX、LS型)
- GX型螺旋输送机是利用螺旋转动将物料沿机壳连续推移而进行输送的。本机具有结构简单，外形尺寸小，成本低，操作安全，能按工艺要求满足多点进料和排料。
- 大倾角波状挡边输送机
- 大倾角波状挡边输送机广泛用于煤炭、粮食、建材、化工、水电和冶金等部门。
- 双螺旋输送机
- 双螺旋输送机适用于颗粒或粉状物料的水平输送，倾斜输送，垂直输送等形式。
- 链式输送机(FU型)
- FU型链式输送机，是一种用于水平（或倾斜≤15°）输送粉状、粒状物料的机械新产品
- 反击破碎机
- 反击破碎机，适用于破碎中硬物料，如水泥厂的石灰石破碎机，具有生产能力大，出料粒度小的特点。
- 座式电磁振动输送机
- GZF、ZDZ-B/L系列电磁振动输送机广泛应用于冶金、建材、煤炭、轻工、机械、粮食等各行业中，用于扰小块状、粉状物料均匀连续地输送；也适用有毒、飞扬物料的输送。
- 反击破设备
- 反击式破碎机(反击破)是一种新型高效率的反击破设备，其特点是体积小，成品呈立方体，构造简单，破碎比大（可达40） ，能耗少，生产能力大，产品粒度均匀，并有选择性的碎石作用。
- 不锈钢螺旋输送机
- 不锈钢螺旋输送机广泛使用在各种工业部门，如建材、电力、化工、冶金、煤炭、铝镁、机械、轻工、粮食及食品行业。
- 反击破
- 反击破适用于破碎中硬物料，如水泥厂的石灰石破碎机，具有生产能力大，出料粒度小的优点。
- 管式电磁振动输送机(GZXG)
- 结构简单，安装方便，不需润滑，使用寿命长，耗电少等优点。本机采用可控硅半波整流控制线路，可以无级调节输送量，实现生产流程的集中控制和自动控制。
- 电机振动输送机(DZS型)
- DZS型电机振动输送机、输送槽为U形槽和管形两种。
- 惯性振动输送机
- 惯性振动输送机用于各种粒状、中等块度以正反非粘性物料（含水量小于5%）。适宜输送高磨耗、高温度（300℃以下）物料。
- 胶带输送机(td75型)
- td75型胶带输送机由于输送量大，结构简单，维修方便，成本低，通用性强等优点而广泛地在冶金、煤炭、交通、水电部门中用来输送散装物料或成件物品。
- 皮带输送机(td75)
- TD75皮带输送机广泛应用于冶金、煤炭、水电、交通等部门，输送散状物料或成件物品。
- 惯性振动热料输送机(SZF型)
- SZF型惯性振动热料输送机是一种兼有锁风功能长距离输送设备。该机适用于输送各种中等块度以正反散粒状物料及水平输送（≤500℃）高温高磨耗物料，如烘干热矿渣、水泥熟料等。适用于水泥立窑窑下，做料封出料机。
- 螺旋输送机(ls)
- LS螺旋输送机利用螺旋旋转而非输送物料，适用于输送各种粉状、粒状、小块状等非粘性的散状物料，如水泥、煤粉、砂、小块煤、炭黑等。可实现封闭输送，防止粉尘飞扬。
- 螺旋输送机(gx)
- gx螺旋输送机是利用螺旋转动将物料沿机壳连续推移而进行输送的。
- 提升输送机
- TD、D型斗式提升输送机适用于垂直输送粉状、粒状及小块状的磨琢性较小的散状物料，如粮食、煤、水泥、碎矿石等。
- 锤式反击破碎机
- 锤式反击破碎机适用于破碎各种脆性材料的矿物，被破碎物料为煤、盐、白亚、石膏、明矾、砖、瓦、石灰石等。
- 螺旋式输送机
- 螺旋式输送机广泛应用于各行业，如建材、化工、电力、冶金、煤矿炭、粮食等行业。
- 粮食输送机,粮食输送设备
- 粮食输送机是一种移动转向式皮带输送机，是一种常见粮食输送设备，主要用于平房仓的散装进仓作业。粮食输送机主要由输送部分，转向部分和行走部分组成。主要适用于大、中型粮食仓库的进仓作业。
- 胶带输送机
- 结构简单、输送量大、维修方便、通用性强，根据工艺要求，既可单机输送也可多机或与其它输送机结成物料的输送系统。
- 链斗式输送机
- 链斗式输送机是以沿轨道运行的料斗来水平或倾斜输送物料的设备。它广泛应用于电站、矿山、冶金、煤炭、化工、建材等行业的各种松散物料的输送。
- 链板式输送机
- 链板式输送机是以大节距特种弯板链条为传送介质，由于链板式输送机的线体结构及输送介质较为坚固，带动金属面板作循环往复运行的一种输送装配设备。
- 埋刮板输送机
- 埋刮板输送机产品广泛适用于冶金、建材、电力、化工、水泥、港口、码头、煤炭、矿山、粮油、食品、饲料、等行业和部门。
- 矿用输送机
- 矿用输送机适用于矿山、冶金、煤炭、化工、水电、码头、砂石场等行业中运输散状或成品物料之用。
- 矿业输送设备
- 埋刮板输送机是输送粉尘状、小颗粒及小块状等物料的连续运输设备，可以水平、倾斜输送，输送物料时，刮板链条全埋在物料之中。本机具有结构简单，使用可靠，造价低廉，输送距离长，并能输送灼热物料等优点，是常用的矿业输送设备。
- 管式电机振动输送机
- 管式电机振动输送机的工作环境温度为-15℃～+40℃。主要有平型（B=300～1200mm）、V型（B=300mm）和槽型（B=400～1200mm）三种。
- 管式输送机
- LS型螺旋管式输送机适用于各行业，如建材、化工、电力、冶金、煤炭、粮食等行业，适用于水平或倾斜输送粉状、粒状和小块状物料，如煤、灰、渣、水泥、粮食等。
- 螺旋输送机
- 螺旋输送机是一种连续输送设备。
最新产品
CZ系列仓壁振动器
- 仓壁振动器用于防止和排除各种料仓由于物料的内摩擦、潮解、带电、成分偏析等原因引起的“堵塞”、“塔拱”现象；亦可用于清除各种仓壁、管道粘结物料
防闭塞装置(ZFB)
惯性振动器(ZG)
振动电机
最新资讯
- 关于网站内容违禁词、极限词失效说明
- 振动输送机的六大选型步骤及四大注意点
- 惯性振动输送机运行期间会出现哪些故障呢
- 刮板输送机的特点表现
- 螺旋输送机的六点操作注意事项
- 中型板式给料机有什么结构特点，怎样维护保养
- 怎样调节惯性振动给料斗出料量大小
- 操作振动给煤机的工作原理是什么，又有哪些操作注意点
- 关于圆振动筛先进结构及使用与维护要点
- 如何维护检修，才能延长电机振动给料机的使用寿命
