高效液相色谱法分析头孢硫脒

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本品为（6R，7R）-3[（乙酰基）甲基]-7-[α-（N，N’-二异丙基脒螺旋进料器硫基）-乙酰胺基]8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸内铵盐。按无水物计算，含C19H28N4O6S2不得少于94.0%。
【性状】 本品矿用皮带机为白色或类白色结晶性粉末；几乎无臭，有引湿性。
本品在水中极易溶解，在乙醇制砂机设备中微溶，在丙酮、氯仿或乙醚中不溶。
比旋度 取本品，精密称定，加水溶解振动电机并制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定（中国药典2000年版二部附录Ⅵ E），比旋度为135°～ 145°。
【鉴别】 （1）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与头孢硫脒对照品主峰的保留时间一致。斜槽输送机
（2）取本品适量，加水溶解并制成每1ml中约含20mg的溶液，作为供试品溶液；另取头孢硫脒对照品适量，加水溶解并制成每1ml中约含20mg的溶液，作为对照品溶液；取对照品溶液和供试品溶液等量混合，作为混合溶液。照薄层色谱法（中国药典2000年版二部附录VB）试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶移动带式输送机G薄层板[取硅胶G2.5g，加含1%羧甲基纤维素钠的磷酸盐缓冲液（pH5.8）适量，调浆制板，经105℃活化1小时，放入干燥器中备用]上，以新鲜配制的甲醇-异丙醇-磷酸盐缓冲液（pH5.8）（7:2:1）为展开剂，展开后，晾干，于100℃加热30分钟，置碘蒸气中显色检视。供试品溶液所显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液的主斑点相同，混合溶液应显一个斑点。
（3）本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致 （中国药典螺旋输送器2000年版二部附录Ⅳ C）。
以上（1）电磁振动筛机、（2）两项可选做一项。
重型板式给料机【检查】 结晶性 取本品少许，依法检查（中国药典2000年版二部附录Ⅸ D），应符合规定。
酸度 取本品，加水制成每1 ml中含0.1g的溶液，依法测定（中国药典2000年版二部附录Ⅵ H给料机），pH值应为4.0～6.0。
溶液的澄清度与颜色取本品5份，各0.6g分别加水5ml溶解后，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（中国药典2000年版二部附录ⅨB）比较，均不得更浓；如显色，与黄色或黄绿色6号标准比色液（中国药典2000年版二部附录Ⅸ A 第一法）比较，均制砂机生产线不得更深。
水分 输送带取本品，照水分测定法（中国药典2000年版二部附录Ⅷ M第一法A）测定，含水分不得过1.5%。
有关物质取本品适量，加流动相制成每1ml中含0.5mg的溶液作为供试品溶液，精密量取适量，加流动相稀释成管链式粉体输送机每1ml中含5μg的溶液作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件测定。量取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分拖尾峰（tailingpeak）。前者少见。>液相输送带色谱色谱峰的峰高约为满量程的20%，再准确量取上述两种溶液各10ml，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，单个杂质峰的基线构成之面积称峰面积。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064Wh/2h>峰面积不得大于对照溶液主成分峰的峰面积（1.0%），各杂质峰峰面积总和（小于对照溶液主成分峰峰面积1/10的杂质峰不计）不得大于对照溶液石料破碎主成分峰峰面积的2.5倍（2.5%）。
二氯甲烷 照氯相色谱法（中国药典2000年版二部附录V E） 测定，
色谱条件与系统适用性试验用6%氰丙基苯-94%二甲基硅氧烷基共聚物为固定相的毛细管色谱柱（30m×0.53mm,涂层厚3.0μm），柱温为30℃（每次进样测定后，柱温升至100℃维持8分钟）。称取二氯甲烷、丙酮和乙醇各适量，加水制成每1ml中各含0.4mg的溶液,作为分离度溶液，量取1μl，注入气相色谱仪。二氯甲烷峰与乙醇峰、丙醇峰的分离度均应符合规定。
取二氯甲烷适量，精密称定，加水定量稀释制成每1ml中含40m g的溶液，作为对照溶液；另取本品约0.1g，精密称定，精密加水2ml，振摇使溶解，作为供试品溶液。精密量取上述两种溶液各1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如显与二氯甲烷对照溶液相应的色谱峰，按内标法以峰面积计算，含二氯甲烷的量不得过0.06%。
细菌内毒素 取本品，依法检查（中国药典2000年版二部附录Ⅺ E），每1mg头孢硫脒中含内毒素的量应小于0.075EU。
无菌 取本品，分别加入100ml 0.9%无菌氯化钠溶液中使溶解，用薄膜过滤法处理后，依法检查（中国药典2000年版二部附录ⅪH），应符合规定。
【含量测定】 照高效液相色谱法（中国药典2000年版二部附录Ⅴ D）测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液（取无水磷酸氢二钠2.76g,枸橼酸1.29g，加水溶解并稀释成1000ml）-乙腈（80：20）为流动相；检测波
长为254nm。理论板数按头孢硫脒峰计算应不低于3000；取头孢硫脒对照品适量，加0.1mol/l盐酸溶液溶解并稀释成每1ml中含头孢硫脒2mg的溶液,置80℃水浴中加热10分钟，放冷，滤过，取续滤液10μl注入液相色谱仪，头孢硫脒峰与其降解产物峰的分离度应符合规定。
测定法 取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含头孢硫脒0.1mg的溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取头孢硫脒对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中C19H28N4O6S2的含量。